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當(dāng)前位置：葡聚糖凝膠過柱的經(jīng)驗
1 Sephadex LH-20是由葡聚糖G-25羥丙基化加工而成 電話 微信掃一掃
（1） 選擇條件：
梯度洗脫在Sephadex使用中并不象在正相柱層析中那么重要
（2） 飽和層析柱：
用洗脫劑將凝膠搖勻
（3） 樣品處理：用盡量少的洗脫劑溶解樣品
（4） 濕法上柱
（5） 洗脫：控制流速，一般1drop/s以下
再生以備下次使用。
Sephadex LH20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主
3 Sephadex LH20 洗脫溶劑。
看完第2點后，就應(yīng)該清楚Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類：反相和正相兩種。用得zui多的是反相溶劑洗脫，以甲醇--水系統(tǒng)zui為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿--甲醇zui為常見，先用50％氯仿--甲醇，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。
如果樣品極性大
1 Sephadex G型葡聚糖凝膠只適合在水中使用，Sephadex G-25羥丙化后就是Sephadex LH-20
6 分離的技巧，zui后說說我的使用心得
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所謂欲速則不達(dá)。
（2）柱子盡可能長， Sephadex LH20 柱長的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力，打擊敵人。
（3） 餾分一定要接的細(xì)，可1／10，或1／20 個保留體積接成一餾分。
（4） 洗脫體積一般為2-3個保留體積，對特殊保留強的化合物，可洗脫5個保留體積。
（5）鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)
（6）Sephadex LH20 對黃酮類成分的分離效果，方法很成型，有大量文獻(xiàn)參考。
（7）填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來，待用
1.裝柱
裝填的重要原則之一就是需要形成一個穩(wěn)定均一的柱床。膠顆粒越均一（粒徑分布越窄），越容易獲得穩(wěn)定均一的柱床。但是對于Sephadex LH-20而言，25～100μm的粒徑范圍相對于許多用于制備色譜的填料而言，不能說分布均一，也就是說其粒徑分布較寬。然而當(dāng)膠溶脹后就相對容易得到均一的柱床。這對于長柱（zui高至250cm）而言也是同樣的。在裝柱前，層析柱和儲槽都必須進(jìn)行*的清洗。
Sephadex LH-20在使用之前必須進(jìn)行溶脹。在溶脹的過程中，要盡量避免過分?jǐn)嚢瑁駝t會破壞球形膠粒，且要避免使用磁力攪拌器。
在室溫下，將凝膠溶脹于層析溶劑中至少三小時，溶脹后膠體積的大小決定于所使用的溶劑系統(tǒng)，請參考后頁之干膠溶脹表計算特定柱體積所需要干膠的量。使溶脹膠體積沉淀之后占總體積的75%，上層溶劑占25%，這時，懸浮液從一個容器倒入另一容器時膠?div id="d48novz" class="flower left">
2.平衡
上樣前
3.洗脫液
為確保延長層析柱的使用壽命
4.樣品
樣品體積應(yīng)該占柱總體積的1-2%，同樣在使用之前樣品應(yīng)該離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾
5.洗脫
洗脫流速應(yīng)根據(jù)情況而定
6.再生
凝膠再生通常是先用2-3個柱體積的洗脫液進(jìn)行清洗
7.體積流速與線性流速的關(guān)系
線性流速=體積流速/橫截面積
8.溶脹體積
由于Sephadex LH-20的溶脹體積依賴于溶劑
新體積=舊體積×（新柱體積/舊柱體積）
9.膠的性質(zhì)
Sephadex LH-20同時具備親水和親脂雙重性質(zhì)
10.排阻極限 4-5KD（與所用溶劑有關(guān)）
11.上樣量
吸附模式 取決于所需分辯率
分子量大小 小于總體積的20%
正相分配 小于總體積的1%
12.其他
膠粒形狀 球形，多孔
顆粒大?div id="d48novz" class="flower left">
顆粒大小中間值（干） 70um（直徑）
顆粒大?div id="d48novz" class="flower left">
顆粒大小中間值（甲醇） 103 um（直徑）
zui大線性流速 720cm/min
參考線性流速 60 cm/min
pH的穩(wěn)定性
操作中 2-11
清洗中 2-13
化學(xué)穩(wěn)定性 在許多水溶液及有機溶劑系統(tǒng)中都穩(wěn)定。在pH2以下或強氧化劑中不穩(wěn)定
高壓滅菌 121℃可忍受20分種
操作溫度 4℃到40℃
保存條件
新填料 4-25℃（干燥）
使用后填料 4-8℃，pH6-8，切勿冷凍，加入抑菌劑（如20%乙醇
13.干膠溶脹表
溶劑 床體積（mL凝膠/g干膠粉末）
Dimethyl sulphoxide 二甲亞砜 4.4～4.6
Pyridine 嘧啶 4.2～4.4
Water 水 4.0～4.4
Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 3.8～4.2
Saline 生理鹽水 3.9～4.1
Methanol 甲醇 3.8～4.1
Methane dichloride 二氯乙烷 3.8～4.1
Chloroform* 氯仿 3.8～4.1
Propanol 丙醇 3.7～4.0
Ethanol** 乙醇 3.6～3.9
Isobutanol 異丁醇 3.6～3.9
Formamide 甲酰胺 3.6～3.9
Methylene dichloride 二氯甲烷 3.6～3.9
Butanol 丁醇 3.5～3.8
Isopropanol 異丙醇 3.3～3.6
Tetrahydrofuran 四氫呋喃 3.3～3.6
Dioxane 二氧雜環(huán)已烷 3.2～3.5
Acetone 丙酮 2.4～2.6
Acetonitrile*** 乙腈 2.2～2.4
Carbon tetrachloride 四氯化碳 1.8～2.2
Benzene 苯 1.6～2.0
Ethyl acetate 乙酸乙酯 1.6～1.8
Toluene 甲苯 1.5～1.6
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